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D.对于新鲜组织:

1) 把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当里的细胞浆蛋白抽提试剂A和B(例如200μl细胞浆蛋白抽提试剂A中加入10μl抽

提试剂B)。并加入PMSF至Zui终浓度为1mM配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200μl组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液,并在玻璃匀浆器

内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。

2) 匀浆后把匀浆液转移到离心管内,冰浴放置15min。

3) 4℃ 1500 g离心5 min。把上清转移至一预冷的塑料管中,为抽提得到的部分细胞浆蛋白。吸上清时千万不要触及沉淀)

4)

沉淀重复步骤1-3开始操作,即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作,抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤3中抽提得到的细胞浆蛋白合并。