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C.对于悬浮细胞:

1)

用PBS洗一遍,离心收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。

2) 每20μl细胞沉淀加入200μl添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。(对于二百万Hela细胞,其细胞沉淀的体积大约为20μl或40 mg)

3)

*速剧烈震荡5s,把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开,可以适当延长震荡时间)

4) 冰浴10-15 min。

5)

加入细胞浆蛋白抽提试剂B10μl。*速剧烈震荡5s,冰浴1min。

6)

*速剧烈震荡5 s,4℃ 12000-16000g离心5min。